多西他赛长循环脂质体的制备
2018-11-05 16:54:45
多西他赛(docetaxel)是在紫杉醇(paclitaxel)结构基础上改造合成出来的新型紫杉醇类似物，其作用机制与紫杉醇相同，都是通过抑制微管蛋白解聚，促进微管双聚体装配成微管，阻滞细胞进入G和M期，从而破坏肿瘤细胞的有丝分裂，临床上主要用于治疗晚期乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌。多西他赛抗癌效果明显，其产品多西他赛注射液(商品名:艾素)已上市多年。但是，由于多西他赛溶解度较低，对体内正常组织毒性较大，严重影响了其应用范围和临床疗效，因此开发新的高效、低毒制剂一直是多西他赛研究的热点。本研究将多西他赛制备成聚乙二醇(PEG)衍生物修饰的长循环脂质体。
仪器和材料
Gextruder-10ml脂质体挤出器(美国Genizer公司);Waters 2695型高效液相色谱仪(沃特世公司);Mastersizer 2000 激光粒度分析仪(英国马尔文公司);Zetasizer Nano 电位分析仪(英国马尔文公司);JEM-2100透射电镜(日本电子公司);GL-22M高速冷冻离心机(南京莱步科技实业有限公司);聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜，规格:0.1μm/0.22μm，密理博中国公司);DF2101S集热式恒温加热磁力搅拌器(河南巩义英峪予华仪器厂);DS-7510DT 声波清洗仪(上海生析声仪器有限公司) 。多西他赛原料药(上海新亚药业有限公司，含量:99.0%);多西他赛对照品( 中国食品药品检定研究院，含量:99.5%);多西他赛注射液(法国赛诺菲-艾万特制药公司，规格:0.5ml∶20mg);蛋黄卵磷脂(PL-100M，上海艾韦特医药有限公司);胆固醇(日本油脂公司);二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000，德国Lipoid公司);无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)。
方法与结论
依次称取处方量的多西他赛、蛋黄卵磷脂、胆固醇、DSPE-PEG 2000加入到250ml梨形瓶中，再加入适量氯仿，轻轻振摇溶解;梨形瓶按转到旋转蒸发仪上，50℃水浴温度下减压除去氯仿，在瓶内形成一层透明状均匀薄膜，继续抽真空4h，完全除尽氯仿;向瓶中加入pH为6.8的磷酸盐缓冲液，50℃水浴温度下搅拌水化磷脂膜一定时间即形成乳白色的长循环脂质体混悬液; 使用带有0.1μm PVDF膜的脂质体挤出器将脂质体混悬液挤出即可得到带有淡蓝色乳光的多西他赛长循环脂质体混悬液; 采用0． 22 μm PVDF 膜过滤除菌，充氮、轧盖密封，即得多西他赛长循环脂质体。
多西他赛长循环脂质体的包封率采用低温速离心法进行测定，具体操作如下:取2.0ml多西他赛长循环脂质体溶液加入到速离心管中，在50000 r·min－ 1的条件下离心1h，离心温度为4℃，上层为含有游离药物的澄清溶液，下层为脂质体沉积液，仔细吸取上层上清液转移到10 ml 量瓶中，加入流动相定容至刻度; 另外，同时精密移取多西他赛长循环脂质体0.5ml于10ml量瓶中，用乙腈破坏脂质体并定容至刻度。分别取上述两种溶液的续滤液采用HPLC 法进行测定。多西他赛长循环脂质体的包封率计算公式为:EE(%)=(1－W游离/W总)×100%。其中:W游离代表脂质体溶液中未被包封多西他赛的浓度;W总代表脂质体溶液中多西他赛的总浓度。经测定多西他赛长循环脂质体中药物的包封率为(95.4±1.5)%。取多西他赛长循环脂质体溶液适量，加入适量蒸馏水稀释后用Malvern 激光粒度测定仪测定脂质体的粒径分布和Zeta电位。多西他赛长循环脂质体的平均粒径为(109.2±28.6)nm，Zeta电位为(－15.8± 2.7）mV。
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多西他赛长循环脂质体的制备与大鼠体内药动学评价_崔强.pdf |
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