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人参皂苷Rg3纳米晶体的高压均质制备

2018-09-23 16:08:54

人参皂苷Rg3为已分离得到的八十多种人参皂苷中抗肿瘤作用较显著的皂苷，能够诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长、侵袭和转移等，并有抗病毒、增强机体免疫力及抗脂质过氧化等广泛药理作用。但人参皂苷Rg3在水中溶解度小，存在溶出速度慢、口服吸收差及生物利用度低等缺点，有报道称口服人参皂苷Ｒg3 0.8mg•kg－1后大至血药浓度仅(4.4±0.8)μg•L－1，生物利用度2.63%，纳米晶体药物是将纯药物形成亚微米颗粒的胶状分散体系，依靠电荷保护剂和立体保护剂维持稳定。该剂型药物无需载体材料，具有分散性好、稳定性高等优点，不论是难溶于水的药物，还是既难溶于水又难溶于油的药物，都可以通过纳米晶体技术提高低溶解度药物的口服生物利用度，也可以悬浮于水中( 纳米混悬剂) 用于静脉注射。或者冻存后制成纳米晶体冻干粉进行保存。如将羟基喜树碱制成纳米混悬液后提高了对人肝癌SMMC-7221细胞的抑制和杀伤作用。故从目前的研究现状来看，把人参皂苷Ｒg3制成纳米晶体能够解决普通剂型生物利用度差的缺点，并且又优于脂质体等纳米载体药物，具有很深远的研究意义。本文运用沉淀法与高压均质法联用技术制备人参皂苷Ｒg3纳米晶体，对其纳米晶体粒径及稳定性进行考察。

仪器和原料

高压均质机NanoDeBEE30-4(苏州微流纳米生物技术有限公司)；85-1磁力搅拌器( 杭州仪表电机有限公司); DW-HL388-86℃低温冰箱(中科美菱低温科技股份有限公司);FD-1-50冷冻干燥机( 北京博医康实验仪器有限公司); Zetaszier Nono-S90激光粒度仪(英国马尔文公司);Shimadzu UFLC液相色谱仪(日本Shimadzu公司);Multiskan MK3型酶标仪和ＲevcoEliteⅡ型二氧化碳(CO2)培养箱(奥赛飞世尔科技公司);CK40型倒置显微镜(Olympus公司);HITACHICＲ21G3型冷冻离心机(天美科学仪器有限公司)。

人参皂苷Ｒg3原料药、泊洛沙姆188、甘露醇（南京森贝伽生物科技有限公司）；甲醇、乙腈，HPLC级（美国Sigma公司）；DMEM细胞培养基、胎牛血清（美国HyClone公司）。

试验方法

人参皂苷Ｒg3纳米晶体的制备：称取人参皂苷Ｒg3原料药60mg，溶于甲醇2.4mL作为有机相;300mg泊洛沙姆188溶于纯化水30mL制备水相;在室温下将药物溶液有机相滴加到搅拌下的水相中制成粗混悬液，再置于高压均质机，在128MPa压强下循环2次，148MPa压强下循环5次制得纳米混悬液。将制得的纳米晶体混悬液20mL与甘露醇0.5g(2.5%，W/V，g•m L－1) ，放入100mL塑料烧杯，溶解后用保鲜膜覆盖烧杯口，并用细针在保鲜膜上刺20个小孔，置-80℃低温冰箱中预冻12h，再移入冷冻干燥机中冷冻干燥40h，制得人参皂苷Ｒg3纳米冻干粉保存。

纳米晶体的粒径和稳定性测定：激光粒度仪对人参皂苷Ｒg3纳米晶体混悬液及冻干粉的粒径及多分散系数进行表征，并将混悬液在2～8℃条件下放置1周、1个月后考察其稳定性。纳米晶混悬液不经稀释直接测定，冻干粉用适量纯化水复溶后测定，每个样品均测定3次，求均数±标准差(x±s)。

纳米晶体中主药的含量测定：采用HPLC法测定并绘制人参皂苷Ｒg3标准曲线，称取一定量人参皂苷Ｒg3纳米冻干粉，甲醇溶解，测得峰面积，计算主药含量。

试验结果

人参皂苷Ｒg3纳米晶体粒径(284±14)nm，多分散系数(polydispersity，PI)为0.156±0.007(图1)，纳米粒粒径较小，多分散系数理想。纳米混悬液在2～8℃条件下放置1 周、1 个月后粒径与PI稍增加，但总体稳定性良好;纳米冻干粉粒径(340±17)nm，PI0.241±0.029，较混悬液略上升(表1)。人参皂苷Ｒg3纳米晶体透射电子显微镜(transmission electron microscope，TEM)观察显示呈长条棒状。