具有脑靶向功能的125I-AIBZM纳米脂质体

2018-11-05 10:04:35

随着社会人口老龄化的加剧,帕金森病和阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病日益引起人们的重视,研究发现这些脑部疾病与脑内神经递质多巴胺异常有关.放射性脑受体显像技术可在人体正常生理或病理状态下,从体外获取脑受体变化的某些相关信息,这对某些中枢神经系统疾病的研究、诊断及治疗具有重要价值,而有效的脑受体显像剂的研制可推动放射性脑受体显像技术的发展.放射性碘标记的苯甲酰胺类衍生物¹²⁵I-(S)-N-(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-5-碘-4-氨基-2-甲氧基苯酰胺(¹²⁵I-AIBZM)与脑内多巴胺D2受体有很高的亲和力,但标记物脂溶性小(lgP=0.5),不易透过血脑屏障,故难以发展成为有效的脑受体显像剂.脂质体是一种类生物膜结构,它是由磷脂分散在水相中形成的双分子层结构.脂质体表面被亲水基团如PEG等修饰后,可增加其在血液循环中的溶解性及稳定性,因而将其作为药物载体应用可以增加药物的溶解性,提高药物的生物利用度.脂质体表面可以进行适当修饰,使其作用于特定的靶器官.由于脂质体具有在人体内无毒、无免疫原性、可降解及缓释等优点而被广泛用作抗肿瘤药、抗结核药、抗感染药、激素、多肽、酶及解毒剂等药物的载体.为增加放射性碘标记物的入脑量,我们将¹²⁵I-AIBZM包载于脂质体纳米载药系统中,并在纳米脂质体上偶联了具有脑靶向功能的乳铁蛋白(Lf).

Na125I(成都中核高通同位素股份有限公司);4-氨基-2-甲氧基-苯甲酸甲酯（苏州诚和医疗化学有限公司）;1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride［1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)］和1-Hydroxybenzotriazolehydrate［1-羟基-苯并-三氮唑( HOBT)］(上海共价化学科技有限公司);1-乙基-2-氨甲基-吡咯烷(江苏省如皋市恒祥化工有限责任公司);磷脂氢化大豆磷脂(HSPC,德国Lipoid公司);胆固醇(Chol,上海源聚生物科技有限公司);二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG-Mal)和聚乙二醇-2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)(美国LaysanBio公司);荧光素DIR(美国Invitrogen公司);Bovine-乳铁蛋白(Lf,日本Wako公司);N-琥珀酰亚胺-3-乙酰硫代丙酸酯(N-succinimidyls-acetyl thiopropionate,SATP,上海玉博生物科技有限公司);葡聚糖凝胶Sephadex G-50(上海化学试剂厂);滤管10K(上海索莱宝生物科技有限公司).

电子天平(德国Sartorius公司);SN-682放射免疫γ计数器(中科院上海原子核所日环仪器厂);FT-3106核素活度计(上海电子仪器厂);380型粒度分析仪(美国NICOMP公司);NanoDeBEE高压均质机(美国BEE公司);Gextruder挤出器(美国Genizer公司);JEM-2010高分辨率通用透射电子显微镜(日本JEOL公司);高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司);In-Vivo MultispectralImaging System(美国Kodak公司).
方法与结论

空白脂质体的制备:空白脂质体的制备采用成膜水化法,按磷脂和胆固醇摩尔比为2:1分别将130mmol的HSPC,65mmol的Chol,9.75mmol的DSPE-PEG和9.75mmol的Mal-PEG-DSPE置于茄形瓶中,用20mL的三氯甲烷溶解,减压旋转蒸发除去有机溶剂,得均匀脂质膜,真空干燥过夜.将脂质膜加入10mL硫酸铵溶液(0.32mol/L)中,于水浴恒温振荡器中振摇2h,得脂质体混悬液.在60℃水浴中,使用高压均质机依次将脂质体挤压过400,200,100,80和50nm核孔膜，得空白脂质体.

Lf-空白脂质体(Lf-L)的制备SATP溶液的配制:精密称取3.5mg SATP溶于250μL DMSO中,浓度为14mg/mL.脱保护剂溶液的配制:称取1.74g盐酸羟氨和0.292g EDTA,溶于40mL去离子水中,用1mol/L NaOH溶液调节pH至7.5,用去离子水定容至50mL.将5mg Lf和11μL SATP溶液加到2.5mL PBS缓冲溶液(pH =7.4)中搅拌反应0.5h,反应结束后以10K滤管在转速为4000r/min条件下滤4次,再将其缓慢滴加到5mL剧烈搅拌的脂质体中(含有0.5mL脱保护剂),于室温下搅拌反应2h得Lf-空白脂质体.

载ABZM脂质体的制备载ABZM脂质体通过硫酸铵梯度主动载药法制备.硫酸铵梯度主动载药法一般适用于弱碱性的药物,其载药原理是依赖脂质体内外水相的NH+4浓度差.精密称取0.9mg ABZM溶于80μL生理盐水与100μL PBS混合液中,配制成浓度为5mg/mL的ABZM溶液.将0.9mL脂质体溶液与100μL ABZM溶液混合,置于60℃摇床中振摇.分别于载药4h与24h后,取出200μL载药混合液过Sephadex G50凝胶柱,除去未被脂质体包载的游离ABZM,收集脂质体溶液350μL.包封率的测定采用标准曲线法.精密称取ABZM适量,以乙腈配制成2mg/mL的储备液.分别吸取上述储备液1000,250,100,25和10μL置于10mL容量瓶中,以乙腈定容,配成浓度分别为200,50,20,5和2μg/mL的标准溶液,进行HPLC分析,以ABZM浓度(μg·mL－1)对峰面积进行线性回归.取200μL载ABZM脂质体溶液加入200μL乙腈中破膜;取10μL此混合液进行HPLC分析,色谱条件为:RP-C18分析柱(4.6mm×250mm);流动相为乙腈/磷酸三乙胺(0.2%)(体积比60∶40);流速1mL/min;进样体积10μL.电镜检测脂质体形状规则,分布均匀,粒径在100nm左右,两种脂质体的125I-AIBZM包封率分别为39%和35%.

具有脑靶向功能的125I-AIBZM纳米脂质体_李光慧.pdf

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