Vasohibin免疫脂质体抑制小鼠肺纤维化

2018-11-10 14:50:55

肺纤维化是一组以肺间质弥漫性炎性渗出、浸润和纤维化为主要特征的一大组疾病,目前发病机制仍不清楚,缺乏特效治疗手段,预后很差.近年的研究进一步发现,肺纤维化模型的新生血管增多与博莱霉素诱发的肺纤维化密切相关.这些研究表明异常的血管重构可能在肺纤维化的发生中起重要作用.Vasohibin是在血管内皮细胞中发现的一种新型血管生成抑制因子,负反馈抑制调节血管内皮生长因子(VEGF)等因子使血管生成处于相对稳定的状态.本研究拟构建Vasohibin免疫脂质体,观察对博莱霉素诱发的肺纤维化的影响,为肺纤维化的早期治疗提供理论基础.
材料与仪器

pcDNA3.1 Vasohibin重组质粒;POPC、DSPE-PEC2000、DSPE-PEC2000-maleimide购自Avanti公司;DDAB购自Fluka公司;脂质体挤出器购自Genizer公司;Sepharose CL-4B为Phamacis公司产品;质粒小量捉取试剂盒购自Sigma公;DNaseⅠ购自TaKaRa公司;博莱霉素粉剂每支15mg,由日本化药株式会社生产;羟脯氨酸试剂盒,由南京建成生物工程有限公司生产.
方法与结果

采用逆相蒸发法将POPC、DDAB、DSPE-PEC2000 及DSPE-PEC2000-maleinide按一定比例溶解于氯仿中,用旋转蒸发仪蒸发除去有机溶剂,置水浴声波仪处理5min,加入一定量质粒DNA在42℃水浴和干冰中反复冻融,并连续通过100nm脂质体挤出器,未包裹入脂质体的质粒用DNaseI和exonucleaseⅢ 37℃作用1h,EDTA终止反应,琼脂糖CL-4B柱分离包裹质粒DNA的脂质体和被核酸酶降解的DNA,琼脂糖凝胶电泳检测.VWF单克隆抗体经修饰琉化后与包裹质粒DNA的脂质体室温下轻摇连接过夜,再次用琼脂糖CL-4B柱分离未连接的抗体和免疫脂质体.将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、肺纤维化模型组和Vasohibin处理组,每组10只.模型组和Vasohibin处理组经鼻一次性滴入博莱霉素7μg/g(20μL),诱导肺纤维化.Vasohibin处理组在造模后3d再次经鼻一次性滴入Vasohibin免疫脂质体20μL.三组小鼠于第14d处死.

与对照组相比,吸入Vasohibin免疫脂质体的小鼠的肺间质血管密度减少,CD31细胞数在模型组平均为(78±12)个,治疗组为(46±16)个,空白对照组为(9±2)个.肺组织羟脯氨酸含量降低,对照组为(1.39±0.23)μg/mg,治疗组为(0.84±0.12)μg/mg.结论Vasohibin免疫脂质体能有效降低博莱霉素诱发的肺纤维化,为肺纤维化的早期治疗提供了理论基础.

Vasohibin免疫脂质体抑制小鼠肺纤维化的实验研究.pdf

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