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熊果酸纳米混悬凝胶剂的制备

2018-11-08 15:57:54

熊果酸(ursolic acid,UA)是存在于山楂、枇杷叶等植物中的一种香树脂醇型五环三萜类化合物,具有抗感染、抗病毒、抑菌、抗肿瘤等多种生物活性,特别是抗肿瘤活性近年来受到深入和系统的研究.熊果酸可抑制乳腺癌MCF-7及SK-BＲ-3细胞增殖,通过影响Bax、Bcl-2、p53等基因的表达来诱导乳腺癌细胞的凋亡,可用于乳腺癌的防治.国内也已有抗肿瘤熊果酸纳米脂质体的开发,但熊果酸溶解性差,水中基本不溶,溶出困难,口服生物利用度低,其成药性差,极大地影响了疗效发挥.

纳米混悬凝胶(NS-gel)是纳米混悬液与凝胶相结合的新体系,结合了纳米混悬剂和凝胶剂各自的特点.难溶性药物制成纳米混悬剂,可提高溶解度和溶出度,纳米级的尺寸能提高药物的渗透性能;将纳米混悬剂制备成凝胶可提高纳米混悬剂的稳定性,同时具有涂布性好、黏附性好、皮肤刺激性小、局部给药后易吸收等优点.本研究将熊果酸制成纳米混悬凝胶,以期提高其经皮渗透性能,使熊果酸可以直接作用于乳腺部位而充分发挥治疗乳腺癌的作用.
材料与仪器

Agilent1260高效液相色谱仪(美国Agilengt公司,包括G1312B二元泵,G1315D DAD检测器,G1329B进样器,G1316A柱温箱,G1322A脱气机);Zetasizer Nano ZS90纳米粒径电位分析仪(英国马尔文公司);S-3400N型扫描电子显微镜(日本日立公司);纯水机(美国密理博公司);SECRURA 125-1CN电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司); NanoDeBEE30-4高压均质机(美国BEE 公司);FJ-200高速分散均质机(上海标本模型厂);JY92-2D声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司);TK-12B透皮扩散试验仪(上海锴凯科技有限公司);TGL-16B离心机(上海安亭科学仪器厂).

熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所);熊果酸原料(西安华瑞生物工程有限公司,质量分数＞98%);泊洛沙姆407(国巴斯夫公司);泊洛沙姆188(德国巴斯夫公司);十二烷基硫酸钠(国药集团化学试剂有限公司);二甲基亚砜(北京百灵威科技有限公司);三乙醇胺(天津市永大化学试剂有限公司);丙二醇( 国药集团化学试剂有限公司);卡波姆-940(广州博峰化学有限公司);乙腈为色谱纯,水为纯水,其余试剂均为分析纯.
方法与结果

用反溶剂沉淀联合高压均质法制备UA-NS:称取300mgUA溶于1.5mL二甲亚砜;将稳定剂分散于60mL水中作为反溶剂,于高速分散均质机(8000r/min)中边剪切边用注射器将二甲亚砜溶液缓慢注入到反溶剂中,均质5min即得不同稳定剂体系的UA纳米晶初混悬液;将初混悬液在高压均质机中进一步均质,得UA-NS.固定有机相中药物质量浓度及反溶剂中稳定剂的质量浓度(0.4%),制备纳米晶初混悬液,以粒径大小及其多分散指数(PDI)考察稳定剂SDS、Tween80、P188、PVP对UA纳米晶初混悬液稳定性的影响.结果显示,P188作为稳定剂的效果较好,平均粒径在300nm左右,但是PDI指数相对较大(＞0.3),表明粒子大小的均一性不够理想.考虑通过高压均质处理提高粒子的均一性,并进一步降低其粒径大小.以p188为稳定剂,按“2.1”项制备得纳米晶初混悬液,固定循环次数为10次,在不同的均质压力下均质,观察粒径和PDI的变化,见图2.可见,纳米晶体的粒径和PDI 随压力的增加均呈现下降趋势,但当压力增大到150MPa以上时,两者的变化甚微,从保护仪器及能源节约的角度考虑,确定均质压力为150MPa.以P188为稳定剂,将初混悬液在150MPa压力下高压均质10次,即得UA-NS.取UA-NS适量,采用纳米粒径电位分析仪测定UA-NS 的粒径.可见,UA-NS的平均粒径为(203.3±8.9) nm,PDI 为(0.159±0.018);另取UA0.3g,均匀分散在60mL含2.5%DMSO和0.4%P188的溶液中,测得UA分散液的平均粒径为(1719±101)nm，PDI为(1.10±0.13).取UA原料药和UA-NS适量,用水分散至适当浓度后滴加至锡箔纸上,自然干燥后于扫描电镜下观察粒子形态,见图4.可见,UA原料药呈不规则的条状或块状,粒子大小约10～100μm;UA-NS则为大小均一的圆整颗粒.

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