响应面分析法优化葫芦素B脂质纳米粒高压均质生产工艺

2018-11-10 08:39:48

葫芦素B属于四环三萜类化合物,是葫芦素家族中含量较丰富的一种,具有消炎、解毒、抗肿瘤、保肝、提高机体免疫力等功能.葫芦素B疏水性强,难溶于水或甲醇,目前有片剂和滴丸两种剂型,但这两种剂型会出现胃肠道不良反应,生物利用度低等问题.脂质纳米粒是指以固态的天然或合成的类脂为骨架材料,将药物包裹于类脂中,制成粒径为100～1000nm的固体胶粒给药系统,具有生物利用度高和毒性低的特点,因此可将葫芦素B包裹于脂质纳米粒中,提高其生物利用度.高压均质法是制备脂质纳米粒的经典方法,生产出的脂质纳米粒具有粒径小、粒度分布均匀和稳定性高等特点,该工艺已经制备平均粒径分别为400nm的克霉唑脂质纳米粒、125nm的白藜芦醇固体脂质纳米粒和149nm的水飞蓟宾脂质纳米粒,其纳米粒包封率高、稳定性好.本研究首先考察高压均质压力、脂质含量和乳化剂含量对葫芦素B脂质纳米粒包封率的影响,确定较佳范围,然后采用响应面分析方法优化高压均质法制备葫芦素B脂质纳米粒的较佳工艺参数,以期为葫芦素B脂质纳米粒的生产提供理论依据.
材料与仪器

葫芦素B标准品四川省维克奇生物科技有限公司;无水乙醇色谱纯,国药集团化学试剂有限公司;单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆188、大豆卵磷脂天,津市光复精细化工研究所.

Agilent1260高效液相色谱仪,配有四元泵及自动进样器、DAD检测器Agilent公司;电热恒温水浴锅北京市永光明医疗仪器厂;KQ-500DE数控声波清洗器昆山市声仪器有限公司;分析天平梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司;MS7-H550-Pro磁力搅拌器SCILOGEX公司;NanoDeBEE30-4高压均质机美国BEE公司.
方法与结果

葫芦素B脂质纳米粒制备脂质纳米粒制备参考方法,并进行改进.选取单硬脂酸甘油酯为脂质,泊洛沙姆188与磷脂等比例混合物为乳化剂.称取10mg葫芦素B与200mg脂质混合,水浴加热至80℃作为油相;称取100mg混合乳化剂溶解于水中加热至80℃作为水相,在磁力搅拌(1000r/min)下,将热的水相滴加入油相中,继续搅拌30min,采用高压均质机进行均质,均质压力85MPa,冰水浴中冷却,即得纳米粒分散液,4℃冷藏备用.准确量取葫芦素B脂质纳米粒溶液1mL,在10000r/min、4℃条件下离心30min,收集上清液.同时,准确量取葫芦素B脂质纳米粒溶液1mL于25mL容量瓶中,加入20mL乙醇,声波处理30min,再使用乙醇定容至25mL.采用HPLC测定上清液及固体脂质纳米粒中葫芦素B浓度.色谱条件同标准曲线的方法.

固定脂质含量为200mg,乳化剂含量为100mg,考察均质压力(40、60、80、100、120 MPa)对包封率的影响;固定脂质含量200mg,均质压力为80MPa,考察乳化剂含量(50、100、200、400、800mg )对包封率的影响;固定均质压力为80MPa,乳化剂含量为100mg,考察脂质含量(50、100、200、400、600mg)对包封率的影响.

结果显示均质压力对葫芦素B脂质纳米粒包封率影响大至,其次是脂质含量和乳化剂含量,当均质压力为74.8MPa,乳化剂、脂质及葫芦素B的比例为12.6:10.3:1时,即泊洛沙姆188含量为63mg,大豆卵磷脂含量63mg,单硬脂酸甘油酯含量103mg,葫芦素B10mg,葫芦素B脂质纳米粒包封率可达92.4%.

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