紫杉醇纳米晶混悬液的制备及表征
2018-09-07 10:23:27
紫杉醇由于具有独特的稳定微管作用,是目前治疗恶性肿瘤的较有效药物之一,可广泛的应用于卵巢癌、转移性乳腺癌、胸腺癌、非小细胞肺癌、食道癌、淋巴瘤、艾滋病卡波济氏肉瘤的治疗。然而其难溶于水的特性限制了临床使用,目前临床应用的主要是紫杉醇注射液Taxol®,但其溶媒聚氧乙烯蓖麻油不良反应较强,容易引起过敏、低血压和神经脱髓鞘等不良反应。因此,开发一种安全有效、质量可控的紫杉醇新制剂具有迫切的临床需求。纳米晶体药物将药物颗粒降低至纳米级,能够有效地提高难溶性药物的溶解度和溶出速率,进而提高生物利用度,同时由于处方中仅含有少量稳定剂,极大的降低了制剂毒性。本文旨在研究一种简单可行的紫杉醇纳米晶混悬液的制备方法,并对其理化性质和体外释放特征进行考察,为紫杉醇纳米晶制剂的研制提供参考。
原料及仪器
高压均质机NanoDeBEE45-4(苏州微流纳米生物技术有限公司);C25分散乳化均质机(上海恒川机械);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司);BP211D型电子天平(德国Sartorius公司);Nano-ZS90粒度仪(英国Malvern公司);H-7650型透射电子显微镜(日本Hitachi公司);ZRS-8G型智能溶出试验仪(天津鑫洲技术公司);SPD-10A高效液相色谱仪(日本岛津);色谱柱为Waters C18键合硅胶柱(4.6mm×25mm,5μm)。
紫杉醇原料药(浙江海正药业股份有限公司,纯度>99%);泊洛沙姆188(德国BASF公司);注射用大豆磷脂(上海太伟药业有限公司);聚山梨酯80(太仓制药厂);注射级聚山梨酯20(南京威尔化工有限公司); PEG4000(SERVA Electrophoresis Gmb H);PVP K12(德国BASF公司);PEG400(国药集团化学试剂有限公司);甲醇(Fisher Scientific,色谱纯);乙腈(Fisher Scientific,色谱纯);冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司,分析纯);灭菌注射用水(石家庄四药有限公司)。
试验方法
称取实验所需紫杉醇、稳定剂混悬于注射用水中,高速剪切机19000r·min-1预分散1min。所得含药混合液置高压均质机,分别在20,40,60,80,100MPa的压力下循环5次,然后以压力120MPa循环20次,制得纳米混悬液。
参照FDA已上市静脉注射剂中含有的辅料种类及大至用量,选用聚山梨酯80、聚山梨酯20、泊洛沙姆188、PEG400、PEG4000、大豆磷脂、PVP K12作为稳定剂筛选对象制备紫杉醇纳米晶混悬液,以初始粒径以及放置过程中粒径的稳定性为考察指标,进行单一稳定剂的筛选。按照紫杉醇用量为1%,各稳定剂用量均为0.5%称取各组分,根据以上均质法制备紫杉醇纳米晶混悬液。
不同稳定剂对纳米晶体的粒径、混悬液的状态影响不同,使用聚山梨酯80、聚山梨酯20、泊洛沙姆188、大豆磷脂制备的纳米晶体粒径较小,且混悬液分散均一,但是室温放置1个月,混悬液分层,药物沉积在底部;使用PEG400、PEG4000、PVP K12制备的纳米晶体初始粒径较大,均为微米级,且放置不稳定,很快出现分层、絮凝现象。大豆磷脂与泊洛沙姆188复配使用,所得混悬液初始粒径小至,且室温放置30d,粒径变化较小,因此确定大豆磷脂和泊洛沙姆 188作为紫杉醇纳米晶混悬液的稳定剂。不同用量的泊洛沙姆188、大豆磷脂制备的紫杉醇纳米晶初始粒径无明显差异,室温放置14d粒经变化也无显著差异,相比而言,泊洛沙姆188、大豆磷脂用量均为0.2%时所制备的混悬液粒径小至,且室温放置14d粒径几乎无增长,因此确定泊洛沙姆188与大豆磷脂的用量均为0.2%。
采用优化后处方,高速剪切机19000r·min-1预分散1min后,依次以20,40,60MPa的压力各循环5次,所得初悬液分别在80,100,110,120MPa的压力下各循环20次,考察不同均质压力对纳米晶混悬液粒径的影响。结果压力分别为80,100,110,120MPa时,所制备的混悬液粒径依次为(295.6±1.63),(260.5±2.33),(238.5±1.86),(249.6±3.54)nm。可知,随着均质压力的增加,紫杉醇纳米晶粒径逐渐减小,当压力为110MPa时,粒径达到小至,而压力为120MPa时,粒径有所增大。因此确定均质压力为110 MPa。
试验结果
处方筛选中,确定泊洛沙姆188用量为0.2%,小于目前FDA已上市静脉注射剂中泊洛沙姆188的大至用量,而且泊洛沙姆188通常被认为无毒、无刺激性,是目前使用在静脉乳剂中合成的乳化剂。磷脂是制备脂质体和全静脉注射脂肪乳注射液的主要成分之一,具有良好的安全性基础。因此,本研究选用大豆磷脂和P188作为紫杉醇纳米晶混悬液的稳定剂,可以保证其在制剂中的安全性。
按照优化后的处方和工艺制备紫杉醇纳米晶混悬液,粒径在240nm左右,满足静脉注射要求 (静脉注射微粒要求平均粒径<1μm,99%粒子<5μm),且室温放置粒径初步稳定性好。采用高压均质机制备,优化工艺操作简便,稳定、可行。
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紫杉醇纳米混悬剂的制备与表征_程晓丹_.pdf |