熊果酸脂肪乳注射液的制备
2018-09-07 15:11:26
熊果酸是从夏枯草、陆英、山楂、枇杷叶、山茱萸、吕贞子、车前草、金线草等多种中草药中提取分离得到的一种五环三萜类化合物，具有特殊的气味。近年来研究表明，ＵA具有抗肝炎、抗肿瘤、抗溃疡、抗菌、降低血糖等多种药理活性，且毒副作用低，不良反应少，得到广泛关注。然而，由于熊果酸在水中的溶解度极低（仅为2.5μｇ·ｍＬ－１），很大程度上限制了其在临床上的应用。脂肪乳注射液是一种水包油（Ｏ／Ｗ）型乳剂，其处方组成通常为植物油、乳化剂、甘油和水。脂肪乳作为一种新型给药系统，具有提高难溶性药物的溶解度；注射给药患者耐受性好，安全性高；具有一定的靶向性；能耐受热压灭菌，稳定性好；工业化生产条件成熟等优点，目前在国内外已有多种注射用脂肪乳上市。本研究将熊果酸制备成脂肪乳，为熊果酸新型给药系统的研究提供新思路。
原料及仪器
伊卡高速剪切机（德国伊卡集团公司）；NanoDeBEE30-4高压均质机（苏州微流纳米生物技术有限公司）；冷冻离心机（日本日立公司）；安捷伦－1200高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；BP211D电子天平（德国赛多利斯集团公司）；ZetaSizer2000HS激光粒度测定仪（英国Malvern公司）；JM21200EX透射电镜（日本电子公司）。
熊果酸（西安飞达生物技术有限公司含量90.0％）；熊果酸对照品（中国食品药品检定研究院，含量93.8％）；注射用大豆油 （铁岭北亚药用油有限公司）；中链三酰甘油、中长链混合三酰甘油、蛋黄卵磷脂E80、蛋黄卵磷脂PC-98T、油酸钠（德国Lipoid公司）；玉米油（苏州捷易龙贸易有限公司）、红花油 （苏州捷易龙贸易有限公司）；蛋黄卵磷脂PL-100M（上海艾韦特医药有限公司）；注射用甘油（浙江遂昌惠康药业有限公司）；注射用水（自制）；乙腈（默克公司，色谱纯）；其他试剂均为分析纯。
试验方法
称取15.0mg熊果酸对照品，精密称定，加入50mL量瓶中，先加入少量乙腈振摇溶解，再加入流动相定容，摇匀，作为对照品贮备液（300.0ug.ml-1）。精密移取5.0mL对照品贮备液至100mL量瓶中，加入流动相定容，摇匀，即得熊果酸对照品溶液（含熊果酸15.0ug.ml-1）。
精密移取1.5mL熊果酸脂肪乳至100mL量瓶中，先加入少量乙腈，振摇破乳，待溶液澄清后过0.22μｍ微孔滤膜，即得熊果酸供试品溶液。另取处方量的辅料混合均匀，按上述配制方法配制供试品溶液。
参考已上市销售的脂肪乳的经典处方组成并结合本实验的前期研究结果，初步确定熊果酸脂肪乳的处方组成：熊果酸为1.0ug.ml-1，油相为100.0ug.ml-1，蛋黄卵磷脂为12.0ug.ml-1，甘油为22.5ug.ml-1，油酸钠为0.5ug.ml-1。
将处方量的熊果酸加入到油相中，于75℃水浴条件下搅拌溶解，再称取处方量的蛋黄卵磷脂加入到上述油相中，氮气保护，加热溶解；依次将处方量的油酸钠和甘油加入到一定量的注射用水中，搅拌溶解，在75℃水浴中保温，制得水相；将高速剪切机刀头放入到水相中，开启机器（转速设置为20000r.min-1），将含药油相缓慢加入到水相中，加入 完 毕后持续剪切处理10min，制得初乳；将初乳的pＨ值调至6.0左右，再用注射用水稀释至全量，转移至高压均质机中，在一定的压力和均质次数下进行均质处理，较终得到熊果酸脂肪乳；将脂肪乳分装到安瓿瓶中，充氮气，封口，121℃高压灭菌15min，冷水浴迅速降温即得。
试验结果
由实验结果可知，在均质压力1000Bar下，增加均质次数，熊果酸脂肪乳粒径减小，经8次均质后，熊果酸脂肪乳粒径基本维持在200nm左右，继续增加均质次数未能减小粒径，因此确定均质次数为8次。由透射电镜照片可知：制备的熊果酸脂肪乳大小较为均匀，呈圆整、规则球形，熊果酸脂肪乳粒径大部分在200nm左右。
熊果酸脂肪乳在加速（40℃／75％）条件下放置1个月后，粒径分布显著增加，当放置2个月后，在液面出现油滴，说明脂肪乳在加速（40℃／75％）条件下不稳定；熊果酸脂肪乳在长期（25℃／60％）条件下放置6个月，平均粒径、Pdi、Zeta电位、pＨ值基本未发生变化，说明脂肪乳在长期稳定性条件下放置稳定性较好。Zeta电位同样是评价脂肪乳 稳定性的另一个重要指标，Zeta电位越高，脂肪乳间的电荷作用力越大，越不易相互吸引而发生凝聚，稳定性越好。本研究制备的熊果酸脂肪乳平均粒径为（203.6±37.1）nm，Zeta电位为（-36.5±3.6）mＶ，有利于熊果酸脂肪乳的稳定性。
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熊果酸脂肪乳注射液的制备及体外评价_宋莉.pdf |
“槐叶未归”调
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