细胞破碎仪制备盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体
2018-09-23 16:09:48
盐酸米托蒽醌(Mitoxantrone,DHAD)是一种人工合成的蒽环类广谱抗肿瘤抗生素,可用于乳腺癌､肝癌､淋巴瘤等恶性肿瘤的治疗,尤其对急性白血病具有显著疗效;较新研究表明,米托蒽醌可提高儿童白血病复发存活率,其效果明显优于过去使用的药物｡但是,与大多数蒽醌类抗癌药物一样,盐酸米托蒽醌有着较为严重的毒副作用｡由于其血浆蛋白结合率高(大于95%),静脉注射后,血药浓度下降显著,广泛分布于各组织｡因此,病灶部位药物浓度相对较小,对癌细胞杀伤能力受限,对正常组织器官毒性较大｡为达到治疗目的,临床上通常予以大剂量治疗,毒性反应表现随之明显｡目前,国内外研究机构较为热衷于运用微粒给药技术对抗癌药物进行开发｡
仪器与材料
细胞破碎仪;JEM-2100型高分辨透射电子显微镜;HH-1型数控恒温水浴;UV-1800型紫外-可见分光光度仪;SephadexG-25葡聚糖凝胶､1.5×20cm玻璃色谱柱;DF-101S集热式恒温磁力搅拌器;数显紫外检测器,LM17型记录仪;PSS激光粒度仪;Milli-QDirect纯水系统;水浴式声清洗机盐酸米托蒽醌原料药;全氢化豆磷脂和PEG化磷脂酰乙醇胺;胆固醇(Sigma公司,纯度>99%);硫酸铵(;无水乙醇;聚乙二醇辛基苯基醚TritonX100;高纯氮气;其余药品､试剂均为国产分析纯。
实验方法
1.空白PEG化脂质体的制备称取16.52g硫酸铵固体,加去离子水溶解,定容至500mL,得浓度为0.25mol·L-1的硫酸铵溶液;使用0.22μm滤膜过滤､分装;量取80mL硫酸铵水相溶液,于恒温磁力搅拌器中预热至65℃保温,调节转速高速稳定｡以质量比3:1:1分别精密称取HSPC､胆固醇和mPEG-PE,氮气流保护下,使用约10mL65℃的无水乙醇充分搅拌溶解制得油相并保温｡使用预热过的玻璃注射器吸取油相,针头探入液面,同时氮气流保护,匀速注入高速搅拌的水相中｡继续65℃搅拌,氮气吹扫挥除乙醇｡1小时后,使用水浴声分散30分钟,得空白PEG化脂质体粗品｡
2.将空白脂质体粗品装于透析袋中,4℃下,使用0.25mol·L-1的硫酸铵溶液透析过夜,除去残留的乙醇｡使用高压连续流细胞破碎仪以2000Bar压力在4℃低温循环水浴中对脂质体粗品进行高压均质,乳匀6次后依次减压通过0.6､0.45μm微孔滤膜,并在无菌环境中使用一次性0.22μm滤器除菌,即得空白PEG化脂质体成品,分装,4℃避光冷藏保存备用｡
3.移取适量空白PEG化脂质体至透析袋中,扎紧;4℃下,以5L生理盐水透析过夜,临用前,再使用pH值为7.4(使用1mol·L-1NaOH溶液调节)的生理盐水透析1h调节外相pH值｡
结果
PSS激光粒度仪测得空白脂质体平均粒径(光强径)为88.7nm,载药脂质体的平均粒径为95.3nm,粒度分布均较为集中且呈单峰正态分布,与电镜观察结果基本一致｡
讨论
本实验以乙醇注入联用微射流高压均质机均质法制备空白PEG化脂质体,工业化前景良好,可较大限度地减少毒性试剂的使用;所采用的铵根离子主动载药法,在中性介质中进行包封且条件较为温和,可以较好地维持脂质体粒径并对多数弱碱性药物进行高效包封,包封率大于80%,符合药典要求｡
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盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体的制备及包封率考察_凌云.pdf |
