温度敏感型纳米载体聚合物胶束的构建
2018-09-23 16:09:42
聚合物胶束一般采用两亲性的大分子作载体材料,遇水后疏水部分缠绕成内核,亲水部分则环绕在外构成外壳,具有明显的核-壳结构｡与小分子表面活性剂形成的胶束相比,聚合物胶束具有热动力学稳定性好､载药量高､载药范围广､稳定性好､体内滞留时间长等特点,可提高药物稳定性和生物利用度,还可在表面连接具有特异性识别功能的靶向分子,实现主动靶向给药,甚至在没有配体结合时,聚合物也可以通过液态内吞作用进入细胞,达到很好的靶向效果[4]｡这些优点使得纳米胶束在难溶性药物增溶､抗肿瘤药物､蛋白质或多肽以及核酸等大分子药物给药系统方面具有很好应用前景｡
仪器与材料
真空冷冻干燥机(Alpha1-4);声细胞粉碎仪(JY92-Ⅱ);高速低温离心机;孵育箱;多点磁力搅拌器;透析袋(300,000);酶标仪,Bio-rad;透射电镜(TecnaiG220);PSS激光粒度仪;恒温振荡器(HH-4)和恒温磁力搅拌器(85-2A)｡
鸡蛋白蛋白(OVA);泊洛沙姆壳聚糖接枝物;2,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠(BCA);其它试剂均为分析纯或化学纯试剂｡
实验过程
1.采用二喹啉甲酸法(BCA法)测定OVA的浓度｡BCA检测法是Lowry测定法的一种改进方法｡与Lowry方法相比,BCA法的操作简单,试剂稳定,几乎不受干扰物质的影响,灵敏度高,应用灵活｡蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能将Cu2+还原成Cu+｡二喹啉甲酸及其钠盐在碱性条件下,可与Cu+结合,生成深紫色的稳定的化合物,这种化合物在562 nm处具有强吸收峰,并且其颜色深浅与蛋白质浓度成正相关,故可采用比色法确定蛋白质的含量
2.配制系列浓度为37.5､75.0､150.0､300.0､600.0μg·mL-1的OVA标准溶液｡将50μL的标准溶液分别加入到96孔板的样品孔中,再加入200μL的BCA工作液,于37℃恒温孵育箱中放置60min｡用酶标仪测定570nm处的吸光度｡以浓度对吸光度作图,即可得到标准曲线｡每个测定的样品设三个复孔｡由于BCA法测定过程中颜色会随着时间的延长而加深,并且与显色反应的速度和温度有关,故每次测定时均做标准曲线｡
3.将聚合物Po-CS溶于去离子水中,得到澄清透明的溶液,磁力搅拌下缓慢的滴加OVA溶液,制得含OVA胶束溶液,继续搅拌5min后,置于高速低温离心机中12,000rpm离心20min,弃上清液,复溶沉淀,冷冻干燥,得纳米胶束｡放置干燥器中,备用｡ 动态激光散射仪(DLS)测定纳米胶束的粒径大小及其分布｡透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)观察纳米粒形态｡
结果
经PSS激光粒度仪检测结果确定纳米胶束的处方如下:聚合物浓度为2mg·mL-1,蛋白质浓度为0.5mg·mL-1,终体积为10mL,冰浴条件下,采用直接分散溶解法制备OVA-Po-CS纳米胶束｡得到纳米胶束的粒径和载药量如表3-4所示,可见本文所采取的纳米胶束制备方法制备的纳米胶束的粒径,载药量和包封率重现性良好,方法稳定｡
讨论
Po-CS纳米胶束的体外释放随着时间的增加而增加｡且在4℃和37℃条件下表现出不同的释放行为｡37℃在4h时累积释放量达30%左右,12h时累加释放量约80%;而4℃时4h内释放完全｡由此表明聚合物胶束的释放行为具有温度响应性｡
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