口服冬凌草甲素纳米结构脂质载体的制备
2018-04-20 16:46:21
冬凌草甲素（Oridonin）是从唇形科香茶菜属碎米亚桠（Rabdosia rubescens）的全草中分离出的一种贝壳杉烯二萜类天然有机化合物。该化合物微溶于水（溶解度约为0.75mg/mL）。冬凌草甲素具有较强的抗肿瘤活性，临床上主要用于肝癌、食管癌、胰腺癌等疾病的治疗。其抗肿瘤的机理较为复杂，已报导的机理包括：1）抑制癌细胞 DNA、RNA和蛋白质的合成；2)通过激活p38MAPK信号通路及/或抑制Wnt/β-catenin信号通路，抑制癌细胞增殖；3）通过激活ERK-p53细胞凋亡通路及/或抑制PTK-Ras-Raf-JNK生存传导通路，诱导癌细胞凋亡；4）阻断诱变剂对靶基因的诱变作用。冬凌草甲素良好的抗肿瘤活性赋予了它重要的药用价值。然而，冬凌草甲素的口服生物利用度不佳。口服给予大鼠不同剂量的冬凌草甲素后，该药的绝对生物利用度均小于11%。因此，提高冬凌草甲素口服吸收、改善其治疗效果具有重要的临床意义。
纳米结构脂质载体（Nanostructured lipid carriers, NLCs）是一种二代脂质纳米粒，由固态脂质、液态脂质以及表面活性剂组成。药物在固、液脂质混合基质中溶解并分散均匀后，能以较稳定的无定形态存在，不会发生重结晶。因此，NLCs具有载药能力强、储存稳定性佳等优点。
高压均质法是一种更加可靠的制备方法，被广泛应用于NLCs大规模生产中。高压均质机主要由高压均质腔和增压机构组成。在增压机构的作用下，受到高压（400-3000bar）推动的物料能快速通过狭窄的均质腔，在短距离内被加速至过1000km/h的高速。物料同时受到高速剪切、高频震荡、气穴作用力和对流撞击等机械力作用和相应的热效应，继而瓦解成纳米级别的小颗粒。一般而言，高压均质机能够负荷脂质含量为5-10%的物料。
本文使用单硬脂酸甘油酯作为固态脂质原料，利用高压均质工艺制成NLCs，解决冬凌草甲素溶解度小的问题。实现载药量和靶向给药功能。
仪器和原料
高压均质机NanoDeBEE(苏州微流纳米生物技术有限公司);精密分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）; 磁力搅拌器、T25 高速剪切仪器（德国IKA公司）;Xevo G2Q-Tof 高分辨质谱（美国Waters公司）;Dionex Ultimate 3000高效液相（美国Thermo公司）;恒温水浴锅（上海跃进医疗器械有限公司）;GWA-UN纯水处理系统（北京普析通用仪器有限责任公司）；JP-040S声波清洗仪（广州洁盟声波仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵（河南予华仪器有限公司）；电导率仪（上海雷磁仪器厂）。
冬凌草甲素（广州保济生物科技有限公司）；中链甘油三酯（法国Gattefosse公司）;单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆F68、十八烷基胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺（阿拉丁试剂（上海）有限公司）；大豆卵磷脂S100（德国Lipoid公司）；氢氧化钠、浓盐酸（广州化学试剂厂）。
试验方法与结果
称取冬凌草甲素90mg、单硬脂酸甘油酯260mg、中链甘油三酯130mg、大豆卵磷脂97.5mg以及十八烷基胺32.5mg，置50mL梨形烧瓶中，加入2mL乙醇，声至药物与辅料完全溶解。旋蒸法除去乙醇，即得油相。称取97.5mg泊洛沙姆F68，置50mL烧杯中，加入10mL 纯水，声至泊洛沙姆F68完全溶解，即得水相。水浴温度设置为75℃，油、水相置于水浴，待油相完全熔融，加入水相。高速剪切转速设置为10,000rpm，混合的油、水相剪切 4分钟，得初产品。高压均质机压力设置为 20,000psi，初产品均质5个循环，即得Ori-NLCs。
Ori-NLCs平均粒径为144.9nm，多分散系数（polydispersity index, PDI）为0.279，ζ电势为49.5mV。包封率为49.54%，载药量为4.81%，表明Ori-NLCs载药能力良好。在透射电镜的观测下，Ori-NLCs均呈类球型，边界清晰，形态良好，粒径大多小于200nm。冬凌草甲素在Ori-NLCs中的溶出速度均大于参比混悬剂；在2小时时间点，已有过60%的冬凌草甲素从NLCs中释放出来；6小时时间点，释放均已接近完成。
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