运用高压均质法制备载药脂质体研究
2018-11-28 14:20:27
血管腔内成形术、自体静脉或人工血管旁路转流术是治疗动脉闭塞性疾病的主要方法，但血管内膜增厚而导致的再狭窄是影响血管重建远期通畅率的主要原因。血管内膜增生涉及血管平滑肌细胞向内膜下迁移、增殖、细胞外基质合成和血管重塑等。
近年来认为，抑制平滑肌细胞增殖是治疗和防止再狭窄的主要策略。许多基于支架的抗增生药物传输系统通过局部给药方式，取得了很好的抑制血管内膜增生效果。在药物支架释放系统中，经典的糖皮质类抗炎药地塞米松是其中代表性药物，但近来研究发现，即使局部使用，地塞米松仍可产生一些不良作用如：平滑肌和胶原含量减少、血管中膜萎缩、细胞凋亡数量增加和内弹力层断裂等，导致血管完整性丧失。靶向载药脂质体是纳米材料技术结合其他多学科技术发展成的新型药物载体系统，可以直接将药物作用于平滑肌细胞，减少局部高浓度药物向周围正常组织弥散导致的不良反应。在这种纳米载体系统中，同时包含有治疗药物和与作用部位结合的特定配体。脂质体结合到靶向细胞的受体后，通过一种“接触辅助药物传输方式”输送药物：脂质体与靶细胞膜表面紧密结合后，表面脂质单分子层与靶细胞膜表面进行脂质交换，这一过程促进亲脂质药物对流至脂质体外层，然后通过交换进入靶细胞，使药物释放时间延长，局部靶向作用更确切。
材料和方法
甲醇，国药集团化学试剂公司，色谱纯；胆固醇，卵磷脂，美国Sigma公司；RGD环五肽，上海科肽生物科技有限公司合成；高压均质机，苏州微流纳米生物技术有限公司；三氯甲烷，国药集团化学试剂公司，分析纯；PSS细胞破碎仪，苏州微流纳米生物技术有限公司；醋酸地塞米松，上海通用药业；240/70型高效液相色谱仪，美国waters公司；380ZLS粒度分析仪，美国NICOMP公司产品。
实验方法
粒径分析和zeta电位测定：取100μL脂质体稀释20倍，声分散5min，制得分散液。用激光粒度仪进行纳米粒度和zeta电位测定。光源：HeNe激光(λ0=633nm)；电位梯度10V/cm；散射角θ=9°；测定温度20℃。靶向载药脂质体的制备：精称适量的膜材料及醋酸地塞米松100mg，适量氯仿溶解，旋转蒸发制成均匀薄膜。再加入PBS缓冲液(pH=7.4)恒温振荡仪中充分水化定容至100mL，细胞破碎仪内声振荡后置入高压均质机内，低压(0.7kPa)循环3次，高压(1.5kPa)循环5次，制成MAL-载药脂质体精密称取适量RGD环五肽加入至MAL-SLs中室温反应过夜。以pH7.4的PBS缓冲液为洗脱液过SephadexG-50凝胶柱，除去游离的RGD环五肽，收集脂质体组分，即得靶向载药脂质体。同法制备不含RGD环五肽的脂质体，脂质成膜后，经PBS水化、声振荡后均质，制成非靶向性载药脂质体。包封率检测：标准品溶液制备：精密秤取醋酸地塞米松标准品10mg，置入50mL容量瓶内，甲醇稀释至刻度。精密移取标准品溶液，分别用流动相稀释，质量浓度分别为56，28，14，7，3.5，1.75mg/L。各取20μL溶液注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积a对药物浓度c(mg/L)进行线性回归分析。主要观察指标：脂质体的粒径、体外缓释曲线、药物包封率、RGD偶联率、体外靶向能力等。
实验结果
脂质体形态及粒径分布 制备的脂质体具有淡蓝色乳光，脂质体呈球状，表面光整，大小较均匀靶向、非靶向载药脂质体粒径分布均较窄，符合Gaussian分布，卡方值(chi squared)<3，平均粒径分别为(175±6)和(180±7)nm。扫描电镜显示靶向载药脂质体呈类圆形，大小较均匀，表面无药物结晶。结果表明普通载药脂质体首日释放率为52.7%，释放速率明显快于同等条件下的靶向载药脂质体(18.7%)及非靶向载药脂质体(16.8%)，并且后两者24h以后逐日释放比率接近线性关系，有较好的体外缓释特性。RGD偶联率结果RGD标准品浓度线性结果显示RGD在1.0~10.0mg/L范围内，浓度与OD值呈线性关系，标准曲线方程y=27.498x+0.1476，R2=0.9992。
讨论与分析
根据偶联率计算公式，靶向性脂质体的RGD偶联率为72.58%。采用高压均质制备方法，经过多次循环后制备的载药脂质体，无论是靶向或者非靶向载药脂质体，两者粒径均在100~200nm之间，符合设计要求，两者差异无显著性意义。靶向性脂质体的粒径较非靶向脂质体粒径稍小，这与其他文献报道吻合，即靶向亲和PEG衍生物的加入会导致脂质体粒径缩小。扫描电镜图像显示，高压均质产生的脂质体呈球形，均匀饱满，表面光整，没有明显药物结晶，符合纳米药物载体的表观要求。药物包封率，是评价脂质体制剂质量好坏的较重要的指标之一，也是脂质体能否发挥较普通制剂高效、低毒特点的关键。本实验所制备的脂质体所载药物为醋酸地塞米松，具有良好脂溶性，能较好包被于脂质层内。实验结果显示非靶向载药脂质体包封率为(96.33±1.02)%，靶向载药脂质体包封率为(97.11±1.16)%，两者差异无显著性意义，经RGD修饰后包封率未受到明显影响。脂质体的疏水性表面或电荷特性，容易被网状内皮系统非特异性清除，因此需要对其进行表面修饰，屏蔽脂质体，避免被机体当作异物而被调理清除。本实验通过高压均质法制备的靶向载药脂质体表观特征符合设计要求，具有较好的缓释性，对受体具有较高的特异性亲和力，这些结果为进一步的体内研究提供了依据。
 |
整合素_v_3受体靶向载药脂质体的制备及体外靶向性_解旭品.pdf |
“槐叶未归”上传
上一页：研究采用高压均质法制备葛根固体脂质纳米粒混悬液及其几种成分释放度
下一页：高压均质黄桃汁的稳定性表征
