蟾毒灵纳米结构脂质载体的制备
2018-09-23 16:05:11
蟾毒灵是中国传统药物蟾酥的主要有效成分，具有广谱抗肿瘤作用，是当前治疗恶性肿瘤的重要药物。然而水溶性差、毒性大、代谢速度快、治疗窗窄等缺点严重限制了其临床应用。为了克服这些缺点，国内外学者采用不同的纳米载体包载蟾毒灵，以使其更加安全、有效、稳定地发挥作用。目前，用于包载蟾毒灵的纳米载体主要为脂质体和纳米结构脂质载体(NLC)。文献报道中，蟾毒灵药物载体的大至包封率为(81.7±0.89)%。NLC是将药物以镶嵌、吸附或溶解的方式存于脂质基质中而形成的载体系统，具有粒径小、表面积大、耐受性好、生物相容性好等优点。与脂质体相比，NLC的固体纳米粒子与外水相之间不存在药物分配现象，能更好地保护药物分子，使其不发生降解，可显著提高稳定性。
微射流式高压均质机：液力细均质技术是使液体物料在高压状态下，形成高速射流，与另外一个方向的高速射流形成高速碰撞，使其中的料被细化。其主要利用特有的Ｙ形结构的交互容腔，使高压溶液中高速运动的物料自相碰撞，大大提离了腔体的使用寿命，同时使用金刚石材料，彻底解决微粒脱落的问题。此类高压均质机一般通过电机带动液压油泵，通过液压系统对物料进行増压。液压系统可提供比机械柱塞式更高的压力，设备体积相对较小，并且物料小至填充量也小，可同时适用于小试到商业化生产，尤其适用于高压的均质乳化。
原料及仪器
高速剪切机(Turrax T25，Fluko，德国);Delsa纳米粒度及Zeta电位分析仪(德国贝克曼库尔特有限公司);UV-1800型紫外可见分光光度计(日本岛津);AL204型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);DK-8D型电热恒温水槽(金坛市科兴仪器厂);冷冻干燥机(北京博医康仪器设备有限公司);1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器(金坛市科兴仪器厂)，KDC-140HＲ高速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司);SHZ-82型数显水浴恒温振荡器(金坛市科兴仪器厂);Nanostar小角X射线散射仪(德国Bruker公司)。微射流高压均质机（Nano DeBEE，美国BEE公司）。
蟾毒灵(北京华奉联博有限公司);油酸聚乙二醇甘油酯(1944CS，法国嘉法狮);双硬脂酸甘油酯(NA，凌峰化学试剂公司);辛酸癸酸甘油酯(MCT阿拉丁试剂);泊洛沙姆477(F127，阿拉丁试剂);泊洛沙姆188(F68，阿拉丁试剂);海藻糖(阿拉丁试剂)，重蒸水(自制);透析袋(Mw:8～14kDa，上海源叶)。
试验方法
蟾毒灵及空白NLC的制备:将30mg·mL－1的油脂按固态油脂(NA)和液态油脂(1944 CS和MCT)3∶1(质量比)比例混合后，加入20mg蟾毒灵，加热至70℃熔融混匀。同时加热含有5mg·mL－1乳化剂(F127和F68)的水相至相同温度，迅速倒入油相中，使油相分散，样品总体积为50mL。用高速剪切机搅拌油水混合物2min(10000r·min－1)，用高压均质机在1300bar下均质，循环3次。将得到的纳米悬浊液冷却过夜，即可得到BUF-NLC。为提高BUF-NLC的稳定性，对其进行冷冻干燥，并用海藻糖作为冷冻保护剂在－20℃下预冻24h，然后放入冷冻干燥机进行冷冻干燥。采用上述操作，不加入蟾毒灵，即可得空白NLC。
将BUF-NLC样品稀释10倍后涡旋1min混合均匀，取400μL稀释后的样品于滤管中，在9000 r·min－1条件下冷冻离心40min，取滤液用紫外可见分光光度计测量其在298nm处的吸光度。制得的BUF-NLC样品用重蒸水稀释一定倍数，用450nm 的滤膜过滤，经动态光散射测定其平均粒径、分散度(PDI)及Zeta电位。测试条件为25℃下平衡4min，重复3次，取平均值。
试验结果
新鲜制备BUF-NLC及存储30dBUFNLC冻干粉包封率分别为(83.1±1.3)%和(80.3±0.8)%，载药量分别为(1.09 ±0.11)%和(1.07±0.09)%。由此可以看出，在30d的存储时间内，包封率和载药量均无明显变化。，加入蟾毒灵后NLC的粒径发生了微小的变化，PDI值明显小于空白NLC，Zeta电位的绝对值有所增加，说明BUF-NLC体系的分散度更好，稳定性增加。另外，BUFNLC平均粒径为147.2±3.2nm，具有被动靶向作用，能高效到达靶细胞，降低对正常组织的毒性。
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蟾毒灵纳米结构脂质载体的制备及性质研究_田振芬.pdf |
