微射流高压均质机制备重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体
2018-04-20 14:50:25
脂质体(liposome)是一种将药物包封于类脂双分子层中所形成的微型球状载体制剂,是一种定向药物载体,属于靶向给药系统｡由Bangham于20世纪60年代中期提出,迄今已广泛应用于生物化学､生物物理学等各种科学领域,并且脂质体作为药物传递系统已广泛应用于临床[8-10]｡自Gregoriadis等利用脂质体作为药物载体以来,脂质体作为一种新型的药物载体的研究与应用迅速发展,脂质体载药技术日趋成熟｡因此本文作者确立了rhaFGF脂质体制备的较佳处方及工艺条件,以期为冠心病的治疗开辟一条新途径｡
仪器与材料
冷冻干燥机;低温高速离心机;扫描电子显微镜S-3400N;PSS激光粒度仪(苏州微流纳米生物技术有限公司代理);KQ-250DB型声波清洗机;ZFQ-85A型旋转蒸发仪;微射流高压均质机;S20KpH指示剂;PLUS384酶标仪;Waters型高效液相色谱仪;色谱柱DiamonsiTMC18,5μm,250mm×4.6mm｡
rhaFGF原液;德固赛大豆磷脂;胆固醇;NIH-3T3细胞;化学试剂均为国产分析纯｡
实验过程
1.脂质体的制备
用冻干再水化法制备脂质体(FRV)｡精密称取大豆卵磷脂1.00g与胆固醇0.05g,溶于50mL三氯甲烷中,声震荡10min后,加入75mL乙醚与25mL三氯甲烷(此过程处于声震源处并需防止水溅入,注意封口防止挥发),滴加0.02mol·L-1､pH7.0的磷酸盐缓冲溶液50mL,声至不分层,形成乳白色油包水化体后进行旋转蒸发,蒸发过程中相变,变成水包油,即得脂质体｡随后在1200~1500bar条件下微射流高压均质机均质15~30min,依次采用1.00､0.60､0.45､0.22μm滤膜进行整粒,加入rhaFGF于37℃孵育15min后加入附形剂混合分装,-40℃预冻2h,冷冻干燥24h后4℃､25℃､37℃保存,使用时加注射用水水化即得rhaFGF脂质体｡
2.脂质体制备工艺优化
通过单因素考察对脂质体处方进行优化,A:磷脂与胆固醇质量之比;B:磷酸盐缓冲溶液pH值;C:微射流高压均质机均质时间｡经单因素实验预试,选取影响包封率因素,每个因素选取三水平进行实验,以药物包封率､物理稳定性和生物活性作为评价指标｡
结果
以En､KE和生物活性为指标,采用单因素考察方法运用冻干再水化法制备的rhaFGF脂质体样品｡以较佳处方工艺条件:即磷脂与胆固醇的比例为20∶1,磷酸盐缓冲液pH值为6.5,微射流高压均质机均质时间为20min制备的rhaFGF脂质体,经测定其En达(81.79±2.51)%,KE为(1.05±0.342)%,生物活性效价为(6.521±0.617)×105U·mL-1｡
讨论
脂质体作为一种新型的药物传递系统,具有以下优势:①增强多肽､蛋白类药物体内外的稳定性的作用;②包裹多肽､蛋白类药物在体内延缓释放,可延长药物的半衰期;③用于多肽､蛋白类药物的载体,可以实现药物的靶向给药;④局部运用可增加药物与局部组织的亲和性,减少刺激[13]｡这些优点为多肽､蛋白质类药物应用,尤其在稳定性､延长体内半衰期及靶向给药领域发挥着越来越大的作用,有着广阔的应用前景｡做为新型药物载体,随着在材料､制备方法､制备工艺､给药途径等方面逐步走向完善,为该类药物制剂的产业化生产奠定了良好的基础｡
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重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备及其物理稳定性评价_滕跃_.pdf |
