PSS激光粒度仪制备枸橼酸二甲双胍阿霉素脂质体

2018-04-20 16:59:40

二甲双胍(metformin,Met)广泛应用于Ⅱ型糖尿病､肥胖症和多囊卵巢综合症的治疗,有较好的耐受性,并且使用Met治疗糖尿病可以降低患者患癌的风险｡研究表明Met可以选择性杀死四种基因型不同的乳腺癌中的肿瘤干细胞,阿霉素(doxorubi-cin,DOX)与Met的联合使用可以杀灭培养的普通肿瘤细胞与肿瘤干细胞,有效抑制了异种移植小鼠肿瘤的生长｡脂质体的制备方法可以分为被动载药法和主动载药法(离子梯度法)｡其中主动载药法又可分为直接产生pH梯度法和间接产生pH梯度法,主动载药法可大大提高两亲性药物的包封率(特别是弱酸､弱碱性药物),降低药物的泄漏｡另有研究表明间接产生pH梯度法也可以使用烃基铵盐(如硫酸甲基铵)代替铵盐形成梯度达到载药目的｡由Met的结构式可知,Met具有烃胺基,可以代替铵离子间接建立pH梯度达到主动载药的目的｡

仪器与材料
BS124s电子分析天平,TN型托盘式扭力天平,DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器,pHS-25型pH计,756MC型紫外可见分光光度计,PSS激光粒度仪,JY92-2D声波细胞粉碎机｡
酸阿霉素,无水乙醇,盐酸二甲双胍,氢化大豆磷脂,胆固醇,聚乙二醇单甲醚2000-胆固醇琥珀酸酯,枸橼酸,乙二胺四乙酸等｡

实验过程
1.Met盐的配制:精密称取1.17gMet,以适量蒸馏水溶解,分别以不同种类的酸调节Met的pH值至7.0,作为水化介质(Met浓度为900mmol·L-1)｡枸橼酸二甲双胍溶液的配制:精密称取0.63g枸橼酸,以适量蒸馏水溶解,以Met调pH至7.0,转移至10.0mL容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,制得300mmol·L-1的枸橼酸二甲双胍溶液｡
2.密移取0.2mLDOX脂质体于10.0mL容量瓶中,加入1.6mL蒸馏水,以体积分数为90%的异丙醇(含0.75mol·L-1HCl)溶液破乳并稀释至刻度,摇匀,于480nm波长下测定吸光度A0,即为药物总吸光度｡另精密移取0.2mLDOX脂质体,置于阳离子交换树脂柱,2000r·min-1离心4min,再于柱加入0.4mL蒸馏水后2000r·min-1离心4min,重复4次,合并洗脱液｡将洗脱液转移至10.0mL量瓶中,用体积分数为90%的异丙醇(含0.75mol·L-1HCl)溶液破乳并稀释至刻度,摇匀,于480nm波长下测定吸光度A1,即为包封药物的吸光度｡并按下式计算包封率:EE(entrapmentefficiency)/%=A1/A0×100｡
3.用PSS激光粒度仪对制剂进行粒度测定,测得枸橼酸二甲双胍阿霉素脂质体的高斯平均体积径为112.7nm,尼康分布主要为2个峰,74.1nm大小粒子占50.1%,369.8nm大小粒子占49.9%｡

结果
PSS激光粒度仪优化的DOX脂质体在(4±2)℃冷藏条件下,150d内制剂外观良好､未见沉淀,平均粒径略有增大,包封率约降低了3%｡较终得到的结果为相同摩尔电荷的阴离子对阿霉素脂质体包封率的影响程度为醋酸根<盐酸根<硫酸根<乙二胺四乙酸根<磷酸根<枸橼酸根｡

讨论
着水化介质浓度的增高,脂质体的包封率出现了先增大后减小的过程｡分析原因为:当水化介质浓度较低时,DOX不能或很少能在脂质体内部形成低溶解性聚合物,因此DOX不能有效地滞留在脂质体内水相,导致包封率较低｡由PSS激光粒度仪测得当水化介质浓度较高时包封率反而下降,考虑可能是因为水化介质浓度的提高会使得磷脂的相变温度升高,导致其活化能提高,进而使得药物装载效率降低｡因此当水化介质浓度达到一定程度时包封率反而会下降｡

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上一页：PSS激光粒度仪考察长春西汀固体脂质纳米粒的性质