PSS激光粒度仪测PEG化聚乳酸羟基乙酸纳米粒的抗黏性
2018-04-21 09:36:21
子宫颈癌是由人乳头瘤病毒(humanpapillo-mavirus,HPV)感染引起的妇科较常见的恶性肿瘤之一,占女性生殖器官癌症的,手术､放疗或化疗是其主要的治疗方式｡手术治疗复发率高且伴有较多的并发症,放疗对全身正常组织损伤较大,对中晚期患者的治疗效果不佳｡常规的口服､静脉注射等给药途径使得药物较均匀地分布到全身各脏器,到达宫颈的药物浓度不高｡因此,一些疫苗及抗病毒药物疗法致力于直接传递药物至女性生殖器官的黏膜表面｡黏膜给药可以诱导全身性的和黏膜表面的体液免疫,是一种比免疫传递等给药更有益的局部给药途径｡
仪器与材料
高效液相色谱仪,PSS激光粒度仪,JY92-Ⅱ声波细胞粉碎机,S-4800冷场发射扫描电镜,OlympusFV1000共聚焦显微镜､1×71倒置显微镜,B×51荧光显微镜等
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA,Mr=18000,m(LA)∶m(GA)=75∶25),单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物,福林-酚试剂､猪胃黏蛋白､香豆素-6(美国Sigma公司),RPMIMedium1640､胰蛋白酶等
实验过程
1.黏蛋白含量测定
采用PSS激光粒度仪测定猪胃黏蛋白(PM)的含量｡分别配制溶液A(含硫酸铜5g·L-1和酒石酸钾钠10g·L-1)与溶液B(含碳酸钠20g·L-1和氢氧化钠4g·L-1),用前以体积比1∶50混合成溶液C｡以PM为标准品,配制成50､100､200､300､400､500mg·L-1的系列标准溶液｡依次加入C溶液和福林-酚试剂,室温放置20min后在酶标仪测量750nm处的吸光度｡以吸光度对PM浓度进行线性回归,得到标准曲线方程｡取样品1d内测定3次,计算测定方法的日内精密度,连续测定3d,计算测定方法的日间精密度｡
2.黏蛋白黏附实验
分别取PLGA-NPs､mPEG-PLGA-NPs1mL(浓度为1g·L-1),加入含PM1mg的PBS溶液1mL,混匀｡37℃孵育1h,混悬液离心(4℃,40000r·min-1,30min),收集上清液,采用福林-酚法测定未黏附的PM质量｡以(1)式计算纳米粒子的抗PM黏附率｡抗黏蛋白黏附率(%)=未黏附的PM的质量PM的初始加入质量×100%｡
结果
PSS激光粒度仪测得的PLGA-NPs和mPEG-PL-GA-NPs粒径､zeta电位以及香豆素-6的包封率mPEG-PLGA-NPs的粒径减小,粒径分布较均匀,这是因为PEG链的存在,使得mPEG-PLGA亲水性增加,在制备过程中聚合物和水的表面张力降低,导致纳米粒子的粒径变小;mPEG-PLGA-NPs的zeta电位比PLGA-NPs低10mV左右,这是由于纳米粒子表面呈电中性的PEG链屏蔽了纳米粒子表面的部分电荷｡微柱离心法所测得香豆素-6的包封率均>70%,说明所制备的纳米粒子包载效果良好｡
