酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备
2018-04-20 14:58:21
酸性成纤维细胞生长因子(acidicfibroblastgrowthfactors，aFGF)是第2个被分离纯化的成纤维细胞因子(FGFs)家族成员。大量临床研究表明aFGF可促进血管生成、创伤愈合、神经组织的营养和修复、肝肾损伤保护作用，有着广阔的临床应用前景。但aFGF体内容易被降解，而且半衰期短，给临床应用带来不便。脂质体作为多肽、蛋白类药物的载体，具有众多优点和用途，且国内外对生长因子脂质体的临床应用均开展了研究。
仪器与材料
MR680型酶标仪；ZRS-8G北洋智能溶出试验仪；EM-2010低温透射电镜；激光粒度仪；精密电子天平；MiniSpin离心机。
aFGF-ELISA试剂盒；aFGF原液；大豆卵磷脂；胆固醇；十八胺；滤离心管。
实验过程
1.采用pH梯度法制备脂质体，取大豆卵磷脂与胆固醇按质量比4B1的比例混合，加入一定量的十八胺，溶于无水乙醇5mL中，于50e旋转蒸发，除去有机溶剂，形成均匀薄膜。加入同温的柠檬酸缓冲液水合2h，探头式声，过0122Lm微孔滤膜，得到空白脂质体。再加入aFGF溶液，用饱和磷酸氢二钠溶液调至适当pH，温育一定时间后，得到载药脂质体。
2.采用ELISA法测定aFGF的浓度。将试剂盒中aFGF标准品，配制成质量浓度为31.2，62.5，125，250，500pg/mL的标准检测液，按试剂盒的方法操作，用酶标仪测定在450nm的吸收度，进行线性回归，得方程为A=011321+01004936c，r=019986，根据方程换算浓度。
3.取aFGF脂质体混悬液适量，适当稀释，用水做支持液，采用激光粒度仪测定aFGF脂质体的粒径。用Zeta电位仪测定aFGF脂质体的Zeta电位。优化后处方制备的aFGF脂质体平均粒径为124103nm，粒径主要分布在96144~146167nm之间，aFGF脂质体的Zeta电位为+9168mV。
4.取aFGF脂质体1mL,置离心管中离心10min(3500r/min),取离心前的脂质体及离心后的上层液各0.13mL,分别用蒸馏水稀释至510mL,以蒸馏水为空白,于波长500nm处测定其吸收度(脂质体离心前后测得的吸收度分别为A0和A),KE=(A0-A)/A@100%。
结果
aFGF为小分子蛋白多肽类药物,溶于水,稳定性低,易失活。先制得空白脂质体,再利用pH梯度原理使得药物进入脂质体,避免了实验中的剧烈外界条件(如声、高温)对aF-GF的活性影响。本实验通过各方面单因素考察优化脂质体,得到包封率较高且稳定的aFGF脂质体。
讨论
目前研究脂质体体外释药的主要方法有透析释药法、生物膜扩散法、连续流动法等。透析释药法的优点是不需要通过离心或过滤将载药脂质体与释放介质分离,因而不会破坏释药平衡,保证载药脂质体没有损失。
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酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备及体外释药动力学_王倩.pdf |
