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重楼总皂苷长循环脂质体的制备与表征

2019-03-05 15:44:08

重楼(Paris polyphylla Smith)属百合科(Liliace-ae),又名蚤休.药用部分为重楼属植物的干燥根茎部,形状呈团块状圆柱形.现代药理研究表明,重楼具有抗菌、抗病毒、止血、镇静、镇痛、止咳、平喘、抗肿瘤、免疫调节等作用等.近年来,该药在抗肿瘤方面的研究,引起学者的广泛关注.由于重楼总皂苷为脂溶性物质,其普通的溶液制剂存在吸收差、生物利用率低等缺点,因此本研究考虑将其制成长循环脂质体,使其具有被动靶向性、毒性小、生物利用度高等优势,从而使其在肿瘤组织中聚集,达到抑制及杀灭肿瘤细胞的作用,同时增强患者的生活质量、降低不良反应、增强患者的身体抵抗力的作用.

仪器与材料

陕西产重楼总皂苷(实验室提取纯化,纯度>95.0%);重楼皂苷I对照品(中国食品药品检定研究院,纯度>98%),重楼皂苷II对照品(中国食品药品检定研究院,纯度>98%);氢化大豆磷脂(注射级,上海东尚实业有限公司);胆固醇(日本油脂公司);聚乙二醇2000-磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE,上海东尚实业有限公司).

脂质体挤出器(美国Genizer公司);Agilent1200高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);Mastersizer2000粒度分析仪(英国马尔文公司);Zetasizer Nano电位分析仪(英国马尔文公司);JM21200EX透射电镜(日本电子公司);GC2120GX日立冷冻离心机(日本日立公司);PVDF膜(规格:0.22μm/0.08μm,密理博中国公司).

方法与结果

对照品溶液制备精密称取减压干燥至恒重的对照品重楼皂苷I和重楼皂苷II各10.0mg,置100ml量瓶中,加入流动相声(200W,20/40kHz)使溶解,放冷至室温,作对照品贮备液(重楼皂苷I和重楼皂苷II浓度均为100μg·ml-1).

供试品溶液制备称取5ml重楼总皂苷长循环脂质体置于100ml量瓶中,加入少量甲醇振摇破乳,加入流动相,水浴声(200W,20/40kHz)后,放冷至室温,摇匀,过滤.另取处方量的辅料混合均匀,按供试品溶液处理方法,处理空白辅料,得到空白辅料供试品溶液.

采用脂质体挤出器法制备重楼总皂苷长循环脂质体.称取处方量的重楼总皂苷,氢化大豆磷脂,胆固醇及PEG2000-DSPE溶于适量氯仿中,置于250ml茄形瓶中,在 45℃减压除去有机溶剂,得到透明均匀薄膜,继续抽真空1h,加入磷酸盐缓冲液(pH为6.5),55℃水化30min,得到重楼总皂苷长循环脂质体初品.将长循环脂质体初品分别经过0.22μm微孔滤膜的脂质体挤出器挤出2次,0.08μm微孔滤膜的脂质体挤出器挤出5次,即得带有乳光重楼总皂苷长循环脂质体混悬液,于4℃下保存.

长循环脂质体经脂质体挤出器后透射电镜照片