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不同粒径大小的二甲基姜黄素脂质体抗癌能力研究

2019-04-26 16:17:40

姜黄素是姜黄根茎药草(姜黄属)中的一种主要成分,现已被广泛用作食品染色剂及调味品.姜黄素通过调节多个分子靶点来表现其抗诱变和抗癌潜能,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种药理作用,且不良反应少而轻微,药源充足,极具开发前景.二甲基姜黄素是姜黄素的衍生物,比姜黄素显示出更高的潜在抗癌活性,并且可以更好的抑制癌细胞的增殖,诱导癌细胞的凋亡,抑制癌细胞的转化、侵袭以及癌细胞的血管形成.在体外细胞系和体内小鼠研究中,二甲基姜黄素已显示出对治疗前列腺癌和脊髓延髓肌萎缩症具有良好的效果.但由于二甲基姜黄素的水溶性差,生物利用度低,本研究将其包封于脂质体内,以改善二甲基姜黄素的溶解度及其生物利用度.

脂质体是由胆固醇和双亲性小分子磷脂组成的双分子层所形成的囊泡包裹药物而形成的制剂,具有靶向性、缓释作用、降低药物毒性和提高药物稳定性等特点.而脂质体的粒径大小对其在体内的分布以及稳定性有一定关系,是影响脂质体在体内发挥作用的主要因素.脂质体的粒径大小常用高压均质机脂质体挤出器进行均质,因此本研究通过制备不同粒径大小的二甲基姜黄素脂质体,考察其粒径大小对二甲基姜黄素杀伤前列腺癌细胞的影响,期待能为脂质体的设计提供新的理念和思路.
材料与仪器

二甲基姜黄素,化学纯CP(常州大学徐德峰实验室提供);大豆卵磷脂,生物试剂BR(国药集团化学试剂有限公司);胆固醇,分析纯AR(国药集团化学试剂有限公司);氯仿,分析纯AR(国药集团化学试剂有限公司);葡萄糖,分析纯AR(天津市北辰方正试剂厂);无水乙醇,分析纯AR(江苏永丰化学试剂有限公司);RPMI1640培养基,胎牛血清FBS,双抗,胰蛋白酶(Gibco公司).
方法与结果

称取大豆卵磷脂0.0023g,胆固醇0.0027g,分别加入5ml氯仿,搅拌使溶解.将大豆卵磷脂和胆固醇溶液混合,旋干溶剂后加入10ml5%葡萄糖溶液,声波细胞清洗机清洗5min,将溶液倒入15ml离心管.用声波细胞破碎仪声30s,停30s,共18次.

测粒径,采用薄膜分散法,用电子天平称取大豆卵磷脂0.0060g,胆固醇0.0065g,二甲基姜黄素0.0016g(物质的量比4:4:1)于烧杯中,加50ml无水乙醇搅拌溶解,倒入梨形瓶中旋干溶剂,加50ml5%葡萄糖溶液,全温摇床0.5h.将上述制备的包药脂质体通过脂质体挤出器100、200、400nm的膜,得到3种粒径的脂质体,分别测粒径.经透析后,取出脂质体放入离心管,再分别测粒径.

二甲基姜黄素脂质体的粒径分布
二甲基姜黄素脂质体的粒径分布

将DU145和C42细胞分别按10000个细胞/穴的浓度放入96穴细胞培养板中.在培养箱培养24h后,将穴中的液体吸出,每穴各加入100μL PBS清洗细胞3次以后,将透析完的二甲基姜黄素脂质体按1.98μg/穴进行细胞给药.96穴细胞培养板加药后放入CO2培养箱.按照不同实验组及时间加入10μL CCK-8,后使用酶标仪测吸光度.通过CCK-8测定,得到粒径为184nm的二甲基姜黄素脂质体对前列腺癌细胞的杀伤力大至,而粒径为250.5nm的二甲基姜黄素脂质体对前列腺癌细胞的杀伤力较小.在一定范围内包药脂质体粒径对二甲基姜黄素抗癌能力随着粒径减小而增强.

脂质体的粒径大小对二甲基姜黄素抗癌能力的影响研究.pdf



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