咨询热线: 18550201458 邮箱: willnano@163.com

  • 脂质体挤出器
  • Genizer超高压均质机
  • Nanogenizer30k高压均质机 出租
  • 脂质体挤出器膜
  • BEE超高压均质机
  • 脂肪乳高压均质系统
  • 金刚石交互容腔

新闻动态

产品推荐

技术资料 当前位置:技术资料

阳离子脂质体在基因转染载体中的研究进展

2018-12-13 14:12:18

目前基因治疗面临的首要技术问题是基因药物的载体,用于基因治疗的载体主要分为两大类:病毒载体和非病毒载体.病毒载体可能在体内发生基因的重组或互补,因此具有较大的潜在危险,限制了它在临床基因治疗上的应用川.非病毒载体中发展最为成熟的是阳离子脂质体(c-ationie11即somes,CL)载体,它具有可自然降解、无免疫原性、可重复转染等优点,迄今已有数十种阳离子脂质体被用于基因转染l1z.该项技术目前已成为基因治疗的研究热点之一,现就其进展综述如下.脂质体(U即80me)是一种自行组装成的具有类似生物膜结构的双分子小囊.经典的脂质体(conv即itonalil-opsomes,CU)在体内很快被肝、脾内的巨噬细胞以非特异反应的方式摄人.阳离子脂质体属于无反应性的立体稳定脂质体(ste ireallysabtil让de11即somes,S`),由于其具有被免疫系统识别和摄取的几率低,DNA脂质体复合物(Upopexes,廿)P的形成不受DNA大小的限制,对高电荷的DNA有较高的转运能力,还能转运RNA、核糖体及其他大电荷分子和大分子物质进入细胞等的特点,而且其转染效率比其他方法高出许多倍,因此被广泛用做基因转染的载体川.阳离子脂质体通常由一个阳离子两性化合物和一个中性或兼性辅助脂(coilnid)组成,而前者又被称为细胞转染素(cytofeCitn).细胞转染素种类繁多,其基本结构为一个带正电荷的头基团(亲水基团)连接在一个疏水基团上,头基团一般是带有.研究表明细胞转染素分子结构及其所带电荷不同对阳离子的基因转染效果影响很大,故开发研制高效的细胞转染家一直是阳离子脂质体基因转载载体研究的重点之一.常用的辅助脂则主要包括二油酞磷脂酞乙醇胺(DOPE)、磷脂酞胆碱(CP)、十八烷奴(SA)等.

传统的脂质体制备方法有薄膜法、反相蒸发法、钙融合法、去污剂法及脂质体挤出器法等,它们都是先用有机溶剂或表面活性剂溶解磷脂,得到粗制的磷脂双层膜,然后对膜进行水化处理,再通过适当方法得到不同大小的脂质体.但由于工艺本身的缺陷、有机溶剂或表面活性剂的残留都会导致DNA的生物活性降低,而且很难实现大批脂质体的制备.新的方法有加热法、超声波法、Cq超临界法等,对于不同的脂质体,不同的制备方法可以得到不同的包封率,进而影响DNA的转染率.所以,应根据具体情况选择合适的制备方法或者在现有的方法基础上进行改进.研究表明用油/水乳剂制备阳离子脂质体能获得更好的稳定性,可减少血清对脂质体的抑制作用.用冻融薄膜法制备的阳离子脂质体被认为有较好的包埋率和较大的脂质体颗粒.

DNA阳离子脂质体复合物进人细胞的途径目前认为有3种模式:①直接与细胞质膜融合;②通过细胞内吞作用进人;③与细胞质膜进行脂质交换进人.最近的一项研究表明DNA阳离子脂质体复合物主要是通过细胞内吞作用进人细胞内,而膜的融合过程也参与了脂质体介导的基因转染,且对较大的复合体进人细胞内具有特殊的重要意义.另一项研究则认为复合体与细胞膜结合后通过内吞进入细胞,在核内体中脂质体与核内体发生膜融合,使DNA从核内体内的复合物中释放出来,接着释放的DNA被选择性进人靶细胞核.然而发现DNA进人细胞的过程似乎并不是基因转染的限速步骤.此外有人提出了DNA解阳离子脂质体复合物可能通过脂膜上形成的小孔而进人细胞,但此模式尚需进一步实验证明.试验证明DNA必须从阳离子脂质体中分离出来,才能发挥它们的效力.证实将裸露的DNA或DNA一脂质体复合物直接注人胞浆中都不能对细胞有效转染,而将质粒DNA直接注入细胞核中却获得很高的基因表达这表明DNA必须从复合物中释放出来,才能进行有效的转染,而oPE可能有帮助核酸释放的作用能明显提高转染效率.

在基因组功能研究方面,脂质体主要被应用于基因表达调控、基因功能、信号转导、药物筛选等方面,如戴大英等通过脂质体介导P一3基因,探讨了该基因对人肝痛细胞端粒酶活性的影响.从而进一步为抗癌药物的选择鉴定了基础,观察了阳离子脂质体转染体外培养神经干细胞的转染效率和外源基因的表达,结果表明阳离子脂质体介导转染神经干细胞效率较高,外源基因表达时间长.

相对于病毒类基因载体,阳离子脂质体具有无免疫原性,无携带致癌基因可能性,以及更易于制备和生产等优点,但还存在一定的局限性如阳离子脂质体的靶向性一般多集中于网状内皮细胞丰富的器官,如肝、脾、肾等,而对其他组织器官的靶向性还部明显;此外,目前阳离子脂质体的制备方法虽多,但尚缺乏一种适于包襄不同种类生物大分子的通用方法.目前急待解决的问题主要包括:如何提高此传递系统的转染效率和降低其细胞毒性;如何加强基因传递系统在生理环境下的稳定性、增强细胞和组织靶向性等.阳离子脂质体的研究重点是多价阳离子头端和长碳链组成的脂质.同时,基于对阳离子脂质的构效关系研究,在分子设计的基础上,经部分修饰的天然化合物在基因转染方面也显出美好前景.相信在不久的将来,阳离子脂质体会在基因治疗中发挥更为重要的作用.

阳离子脂质体在基因转染载体中的研究进展.pdf



 " 巡山"上传

上一页:药物载体非PEG空白脂质体的制备

下一页:阴阳离子脂质体复合物介导的基因转染