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盐酸小檗碱脂质体的制备及表征

2018-12-06 14:57:33

盐酸小檗碱(黄连素,Berberine Hydrochloriide,BER)是从毛莨科植物中提取的一种异喹啉类生物碱,过去主要通过肠道给药用来治疗胃肠炎、细菌性痢疾以及一般性肠道感染.近年来研究发现,小檗碱对人类肝癌细胞、结肠肿瘤细胞、食管癌细胞、脑肿瘤细胞等都具有一定的抑制作用.但盐酸小檗碱体内调节脂、糖代谢紊乱和抑瘤作用没有体外明显,这可能因为盐酸小檗碱胃肠道吸收差,在体内很难达到对肿瘤细胞直接作用的较高血药浓度.盐酸小檗碱普通注射液静脉给药,可能引起药疹、过敏反应、血色素及红细胞减少以及药敏性休克等副作用.1982年以来,我国已经禁止使用盐酸小檗碱普通注射液静脉给药,因此,如何发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果,降低副作用是研究者面临的一大问题.将盐酸小檗碱包封于脂质体内水相中,脂质体可以起到很好的载体作用,增加小檗碱的生物利用度.综上所述,为了解决盐酸小檗碱胃肠道吸收差和普通注射液静脉注射产生的严重不良反应,更好地发挥盐酸小檗碱的药效,降低其毒副作用,使其具有长循环功效,采用硫酸铵梯度法制备盐酸小檗碱脂质体注射液,获得比较高的包封率,在硫酸铵梯度法基础上,进一步提升磷脂双分子层内外跨膜pH值(△pH),可以进一步提高包封率至98%以上.

采用两种大豆磷脂酰胆碱、即非饱和的大豆磷脂酰胆碱(SPC)和饱和大豆磷脂酰胆碱(HSPC)为膜材,采用硫酸铵梯度法制备盐酸小檗碱脂质体,以包封率为考察指标,通过单因素考察和正交试验设计优化处方与工艺,较为系统地研究了各因素对盐酸小檗碱脂质体包封率的影响,并考察采用硫酸铵+依地酸钙钠梯度法制备盐酸小檗碱脂质体的体外释放行为.
材料与仪器

岛津高效液相色谱仪系统,包括LC-20ATvp泵,SPD-20Avp紫外检测器,LCsolution色谱工作站;PHS-3C型精密数显pH计(上海精科);303-1电热培养箱(江苏东台仪器厂);GeExtruder脂质体挤出仪(美国Genizer);Nano-ZS粒度测定仪(Malvern,英国);H-7650透射电镜(日本HITACHI);ZRS-8G智能溶出仪(天津大学无线电厂).

盐酸小檗碱对照品(纯度99.7%,水分0.84%,南京海光应用化学研究所);盐酸小檗碱脂质体注射液(规格为8mL:40mg,江苏奥赛康药业股份有限公司);α-生育酚(东京化成工业株式会社);胆固醇(CHOL,日本精化);MPEG2000-DSPE(聚乙二醇化磷脂酰乙醇胺)、HSPC(氢化磷脂酰胆碱,德国Lipoid公司产品);葡萄糖(山东祥瑞药业有限公司);磷酸氢二钠、磷酸二氢钠为ACROS ORGANICS产品(实验室用);甲醇、三氟乙酸(色谱级,美国天地试剂公司);注射用水(自制).
方法与结果

精密称量SPC300.0mg、CHOL100.0mg按质量比3:1的比例混合,用叔丁醇4mL,加温至45℃使溶解,加入250mmol·L-1硫酸铵溶液2mL(水相-油相体积比1:2)进行短时超声,直至形成稳定的W/O乳剂,减压蒸发除去有机溶剂,达到胶态后,再滴加250mmol·L-1硫酸铵溶液6mL,继续旋转蒸发形成脂质体混悬液,将制得的脂质体挤出器中挤出整粒,依次通过0.45、0.2、0.1μm的微孔滤膜.制得的空白脂质体过中空纤维过滤系统,用5倍体积量的洗脱液洗涤,得空白脂质体6mL.空白脂质体中加入5mg·mL-1的盐酸小檗碱溶液10mL,55℃水浴孵化30min,浓缩样品至10mL,即得盐酸小檗碱脂质体注射液.洗脱液即PBGS缓冲液组成:称取葡萄糖(Mw=180.16)486.1g,加入已冷却的注射用水7.2L使溶解,并定容至9L;取出上述葡萄糖溶液6L,加入磷酸氢二钠十二水合物(Mw=358.14)10.744g,搅拌使溶解;剩余葡萄糖溶液3L,加入磷酸二氢钠二水合物(Mw=156.01)4.680g,搅拌使溶解;两相逐步混合,调节最终溶液的pH值为7.0,得PBGS缓冲液.

制备出的脂质体平均粒径在110nm左右,粒度分布均匀,该粒径的脂质体不易发生沉降现象,因为本身存在着布朗运动,可以完全克服脂质体本身重力影响,使脂质体处于动力学稳定状态体系中;该脂质体呈明显的电负性,Zeta电位为-7mV,可以使脂质体之间存在一定的排斥力,不易凝聚,有利于脂质体制剂的长期贮藏.包封率在98%以上经透射电镜观察脂质体的结构和粒度分布,可清晰地观察到脂质体具有磷脂双分子层结构,呈小单室脂质体形态,具有类球形结构.

盐酸小檗碱脂质体的制备及体外释放度测定.pdf
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