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三七总皂苷传递体的制备

2018-11-05 09:33:28

三七是五加科(Araliaceae)植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎,是中医传统用于体内外各种出血证及跌打损伤、瘀滞肿痛的要药.三七总皂苷(Panax notoginsengsaponins,PNS)是其主要有效部位,PNS中主要成分有人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和三七皂苷R1等.现代药理学研究表明,PNS 药理作用主要有活血、镇痛、抗炎及促进骨折愈合,同时,还具有改善微循环、增加血流量、扩张血管等作用,从而使骨内外的血液动力学和血液流变学得以改善、骨内压下降、恢复生理代谢、软骨组织得以修复、症状得以缓解.在临床上PNS广泛用于软组织损伤、骨折的愈合、骨关节损伤及肢体功能的恢复等.但是,目前PNS的市售剂型主要以口服给药制剂及静注制剂为主,这对于身体局部软组织损伤的治疗并不是理想的给药途径,而药物皮肤应用常可以提高用药部位皮肤下局部组织药物浓度.传递体(transfersomes)是一种高效的经皮给药载体,其外壁由磷脂等脂质材料和边缘活化剂(edge activators)构成,边缘活化剂的加入使外壁双分子层具有变形性,同时皮肤水化梯度造成的渗透力对传递体进入皮肤有驱动作用.传递体技术因其安全、高效且与皮肤相容性好而成为近年来国内外经皮药物传输系统研究的焦点.故将PNS制成传递体经皮给药制剂可以提高PNS在病灶部位的有效浓度,提高其生物利用度.本实验以PNS传递体的弹性为指标,优化了传递体的处方,并对所得传递体治疗大鼠急性软组织损伤作用进行评价,研究结果可以为PNS传递体的制剂开发与临床应用提供依据.
仪器与材料

LC-2130高效液相色谱仪、LC-2030 紫外检测器,上海天美科学仪器有限公司;BS124S 电子天平,德国萨多利斯公司;R-502 旋转蒸发器,上海申胜生物技术有限公司;Q501 恒温水浴锅,巩义市英峪高科仪器厂;Gextruder-10ml高压膜挤出器,美国Genizer公司;BX51光学显微镜,日本奥林巴斯公司;pHS-3C pH计,上海精密科学仪器有限公司;5804R冷冻离心机,德国Eppendorf公司;XL2000超声破碎仪,美国Misonix公司;Nano-ZS90激光粒度仪,英国Malvern公司;JEM-1200EX 型透射电子显微镜,日本Jeol公司;Microcon离心超滤管,1×105,美国Millipore公司;聚碳酸酯径迹蚀刻膜,0.05、0.1μm,英国Whatman公司;自制重物自由落体打击装置,自制;FASCO-3020B全自动血液流变快测仪,重庆大学维多生物工程研究所有限公司.

PNS,注射级,云南植物药业有限公司;对照品人参皂苷Rg1(质量分数97.7%)、人参皂苷Rb1(质量分数92.6%),中国食品药品检定研究院;高纯胆固醇(CH),注射级,上海艾伟特医药科技有限公司;维生素E(VE),浙江新和成股份有限公司;大豆卵磷脂(sbPC),注射级,PC≥70%,上海太伟药业有限公司;柠檬烯(质量分数≥,西藏奇正藏药股份有限公司;乙腈,色谱纯,美国Honeywell公司;HPLC用水为双蒸水,其余试剂均为分析纯.
方法与结论

根据前期单因素考察的结果,处方暂定:PNS100mg、CH15mg、sbPC120mg、VE2 mg、混合中药挥发油(柠檬烯-柠檬醛1:1)40mg、水化液[磷酸盐缓冲液(PBS),pH 6.8,相对离子浓度为1/10,相对离子浓度1所对应的水化液为1/15mol/L磷酸二氢钾溶液-1/15mol/L磷酸氢二钠溶液(53.4:46.6)的混合液]10mL.称取处方量的PNS、CH、sbPC、VE、中药挥发油,溶于35mL甲醇-二氯甲烷(3:4)混合溶剂中,转移至500mL茄形瓶中,在避光、45℃、50r/min下减压旋转蒸发去除溶剂,得到干膜,继续旋转蒸发2h以确保有机溶剂除尽,加入10mL水化液,振摇至水化完全,放置过夜后进行超声破碎处理(温度25℃,功率19W,时间1min,开5s,关5s),并将传递体混悬液在40℃水浴、氮气压条件下依次挤压通过100nm与50nm孔径的聚碳酸酯径迹蚀刻膜(挤出压力分别为0.25、0.49MPa),即得PNS传递体样品.

包封率测定以HPLC法结合离心超滤法进行测定.取待测传递体混悬液样品,摇匀,精密量取200μL,置于超滤离心管内,进行冷冻离心(离心力3000g,温度4℃),收集全部外水相,转移至1mL量瓶中,以流动相定容,摇匀,按2.2.1项测定人参皂苷Rg1及Rb1的峰面积,按标准曲线计算外水相中药物的量,按下式计算包封率,每个样品平行测定3次.取适量PNS传递体样品,以蒸馏水稀释10倍后,用激光粒度仪测定其粒径及Zeta电位.所有样品在室温条件下,平行测定3次.

PNS传递体最佳处方为PNS100mg、胆固醇15mg、大豆磷脂120mg、维生素E 2mg、中药挥发油(柠檬烯-柠檬醛4:1)80mg、水化液[磷酸盐缓冲液(PBS),pH 5.0]10 mL;以最佳处方制得的成品弹性为(2.74±0.32)min、粒径为(123.60±0.36)nm、Zeta电位为(−36.67±2.29)mV,人参皂苷Rg1与人参皂苷Rb1的包封率分别为(82.42±0.69)%、(94.40±0.74)%.

三七总皂苷传递体的制备及其治疗大鼠急性软组织损伤作用研究.pdf
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