Nanogenizer高压均质机破碎大肠杆菌实验

2019-10-16 08:17:04

1、将培养24h的大肠杆菌发酵液4000rpm离心15min，去上清，用缓冲液重新悬浮。

2、取100uL适当稀释，涂布含有氨苄青霉素和氯霉素的平板，进行活菌计数。

3、将剩余的菌液分为2份，用交互容腔型通道，15000psi分别均质3次、5次。

4、均质后的菌液各取100uL，适当稀释，涂布含有氨苄青霉素和氯霉素的平板，进行活菌计数。
2.2 蛋白提取法

先把细菌15000psi分别均质3次、5次。11000-13000rpm离心15min，取上清进行蛋白提取并测定蛋白含量。
 
三、实验结果

均质3次后，菌液中有较多絮状物，且出现分层现象，怀疑是均质不够彻底，菌体碎片比较大；均质5次后溶液较为均一。

 2、均质前计数结果

菌液稀释10⁵倍后，长出大约500个单菌落，可估算出菌液中大肠杆菌的浓度约为5×10⁸个/mL。

 3、均质3次计数结果

菌液稀释10³倍后，长出大约20个单菌落，可估算出菌液中大肠杆菌的浓度约为2×10⁴个/mL。

 4、均质5次后，未检测到活菌。

均质5次后的菌液稀释10倍、10²倍、10³倍后，均没有长出菌落。
   

5、均质3次和5次的蛋白提取检测结果
 

这张图是检测的蛋白，分别是Z型均质3次、Z型均质5次、Y性均质5次。从图上来看，不管是3次还是5次，菌中的蛋白都能提取出来，效果差不多。对于我们的项目而言，均质5次效果更好，可能是细菌被打的很碎的话更容易提取蛋白。
 
四、结论

1） 均质3次的破碎率(活菌计数法)优于99.99%

2） 均质5次的破碎率(活菌计数法)为100%

3） 均质3次和5次的蛋白提取量一致。


 

上一页：第一届“平论药剂”论坛会议内容

下一页：美国Genizer高压均质机在浙江大学完成安装验收